107年第二次食品技師

1. 外標準法與其標準曲線 (External standard curve)
   外標準法：以所要定量的樣品標準品作系列稀釋，但注意樣品的濃度要在這些標準品的稀釋範圍內。在相同的分析條件下，將上述標準品稀釋液做同樣的吸光光度計分析，以縱座標吸光值對應於橫坐標(不同濃度的標準溶液)做出標準曲線圖(standard curve)。將不同濃度標準品所得的積分面積(X)與其濃度(Y)作直線迴歸Y＝aX＋b方程式，由Y吸光值即可算出樣品溶液的濃度X。 外標法也稱為標準曲線法。
   其特點及要求：
   1. 操作條件變化對結果準確性影響較大。
   2. 對進樣量的準確性控制要求較高。
   3. 優點簡便快速
   
2. 內標準法（internal standard method)：
   內標準法簡稱內標法，係稱取一定重量且物質與樣品相似的某純物質作為內標準物，加入至已知重量的樣品中，混合均勻後成分注入管柱中進行分析。
   根據樣品及內標準物的重量和峰面積，可求出待測定成分之含量。
   內標物要滿足以下要求：
   1. 試樣中不含有該物質；
   2. 與被測組成分性質比較接近；
   3. 不與試樣發生化學反應；
   4. 滯留時間應位於被測組成分附近，且無組成分波峰影響。

1. 碘價 (Iodine value)
   100克油脂進行碘加成反應，能夠吸收的鹵化碘（ICl或IBr）量以碘的克數表示的值，稱為碘價 (iodine value, IV)。
   藉由碘價之測定可用以判定油脂乾性、半乾性與不乾性之性質，碘價亦可測知油脂不飽和程度 (雙鍵數)，雙鍵數越多，IV值越大，當油脂氫化，IV值下降。
2. 測定碘價常使用威治氏WIJS法，原理如下:
   氯化碘溶液（威治氏WIJS液）：氯化碘法，為ICL + 冰醋酸，用於測定IV。
   屬於以Wijs法測定待測樣品吸收碘的質量的方法，並以每100 g脂肪酸甲酯所吸收碘之克數表示測定結果。吸收的碘以硫化硫酸鈉溶液滴定，以澱粉為指示劑，同時做空白試驗，由滴定量求出碘價。
   將碘13克溶於1 L冰醋酸（特級），以吸管吸取10 ml，再以0.1N硫代硫酸鈉標準溶液滴定求出其濃度。然後於剩下的碘溶液中通入精製乾燥的氯氣，當液體從暗褐色急變為橙紅色時，即停止通入氯氣。再用吸管吸取10 ml，加入10ml之10%碘化鉀溶液，再加入蒸餾水100 ml，充分攪拌，以0.1N硫化硫酸鈉溶液滴定，滴定至溶液呈淡黃色時，才加入數滴澱粉指示劑搖晃，此時溶液呈深藍色，繼續滴定，充分振盪，滴定至澱粉藍色消失時即為滴定終點。另再進行一組不加油脂但操作過程完全一樣之空白試驗。
   碘價計算法: $$ 碘價(IV)= \frac {(b-s) \times F \times 0.01269}{S} \times 100$$
   • b：空白實驗之$0.1N$ $Na_2S_2O_3$ 溶液的消耗量(ml)
   • s：本實驗樣品之$0.1N$ $Na_2S_2O_3$ 溶液的消耗量(ml)
   • 0.01269：$0.1N$ $Na_2S_2O_3$ 相當於碘之g數
   • S：油脂樣品稱取量(g)
   • F：$0.1N$ $Na_2S_2O_3$ 溶液的力價
3. 澱粉指示劑加入的時機:
   以0.1N硫化硫酸鈉溶液滴定，滴定至溶液呈淡黃色時，才加入數滴澱粉指示劑搖晃。澱粉指示劑加入後，反應溶液呈深藍色，繼續以硫化硫酸鈉滴定，充分振盪，滴定至澱粉藍色消失時即為滴定終點。

1. 電噴灑游離法（electrospray ionization, ESI）：
   這是將液態樣本轉化成氣態離子的基本方法。經由高電壓與高速氣體的噴灑作用，流注的溶液變成許多微細的液滴。這些帶有電荷的液滴在電場的引導下，進入質譜儀的前開口，在高熱與真空的狀態下，液滴內的溶劑會逐漸蒸發掉。隨著液滴的體積縮小，其表面電荷密度便逐漸增加。 這些電荷因距離縮短而斥力增加，使得帶電的胜肽被迫離開液滴，隨電場而進入質譜儀的內部。在 ESI 作用下，胜肽與蛋白質常帶有多個電荷。一般而言，長度越長所帶的電荷越多。大部分的胜肽與蛋白質的質荷比（m/z） 皆落在類似的範圍內。
   
2. 大氣壓力化學游離法 (atmospheric pressure chemical ionization, APCI)：
   大氣壓力化學游離法（APCI）：APCI中，一開始的裝置與ESI類似，有一N2流幫助溶液霧化。但與ESI不同的是，APCI在進行離子化之前設置了一個加熱區，先將樣品汽化，產生液體噴霧後，再透過一高電壓（~6000 V）的放電針（corona needle），使得分析物可在常壓下被游離成離子。隨後通入N2作為反應氣體（reagent gas），進行化學游離。APCI特點是：(1)與ESI不同，使用APCI所產生的分析物離子只帶單一電荷。(2)可量測的質量上限 < 1000，而且由於不能產生足夠的碎片，而且質量分析器所能測到的m/z也有上限，所以APCI不適合用來測大分子。(3)APCI所需要的分析物揮發性，較ESI來的高；亦即，APCI較適用於極性小的分析物。這是因為ESI的分析物在霧化時就已帶電荷，而APCI的分析物在霧化後並未帶電荷，而是須先變成氣相之後，透過放電針而帶電。由於APCI不是透過高能電子直接撞擊樣品，所以轉移給樣品的能量不會太多，樣品所獲得的能量較低，而且產生的質子化離子MH+較分子離子M+穩定。所以與 ESI相比，APCI是傷害比較小的離子化方式，產生的碎片比率較低。
3. 電噴灑離子化(electrospray ionization, ESI) ：
   適用於大分子化合物(如蛋白質)等生化大分子的重要技術。電噴灑過程中，生化大分子會形成多電荷之離子，可降低分子離子之質荷比(m/z)， 使不致超出質量分析器之檢測極限。
   在 ESI 作用下，胜肽與蛋白質常帶有多個電荷。一般而言，長度越長所帶的電荷越多。大部分的胜肽與蛋白質的質荷比（m/z） 皆落在類似的範圍內。

1. 由操作知，蜜餞樣品10 g 萃出15 mL，分析時樣品稀釋50ml/15 ml = 3.3334倍
2. 由實驗外標準法得知，y為吸光度 (縱作標)，x為濃度 (橫作標，分別是2.0, 4.0, 6.0, 8.0 ug/mL )。
3. A225吸光值 (減去空白試驗，只有0.01 M NaOH溶液): 0.37-0.01 = 0.36
4. 代入迴歸直線方程式 y = aX+ b = 0.05x + 0.01
   0.36= 0.05x + 0.01
   0.05x = 0.35
   所以 x = 7 ug/mL

有機化合物$C_7H_8O$為防腐劑苯甲醇，其紅外線光譜IR，如下。

苯甲醇$C_7H_8O$的有機紅外線圖譜分析IR，如下。

• A：縮合的O--H 伸縮振動
• B：芳香環上 C—H伸縮振動
• C：亞甲基的C—H伸縮振動
• D：芳香環上 C—C伸縮振動
• E：C—O伸縮振動
• 芳香環上 C—C與 C—H 彎曲振動